Annexin V-FITC / PI 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。在正常細(xì)胞中，PS只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的PS由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細(xì)胞可以識別翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細(xì)胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng)，而在細(xì)胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。

AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS高親和力特異性結(jié)合。PS 外翻發(fā)生在細(xì)胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS 的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測標(biāo)志事件。

檢測原理：

用標(biāo)記了FITC的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。細(xì)胞壞死的過程中也會發(fā)生細(xì)胞膜損傷，壞死的細(xì)胞會結(jié)合Annexin V-FITC。正常細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜是完整的，Propidium iodide（PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和壞死細(xì)胞，PI能夠透過細(xì)胞膜與細(xì)胞核結(jié)合呈現(xiàn)紅色。將AnnexinⅤ與PI匹配使用，可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。壞死細(xì)胞可以同時與Annexin V-FITC 和PI 結(jié)合顯色，而PI 則被排除在活細(xì)胞（FITC 陰性）和早期凋亡細(xì)胞（FITC 陽性）之外。在沒有巨噬細(xì)胞的情況下，凋亡的最后階段會像細(xì)胞壞死一樣發(fā)生整個細(xì)胞的解體，從而使凋亡晚期的細(xì)胞也同時被FITC 和PI 結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性。

貝博Annexin V-FITC / PI 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒可以方便快捷的檢測凋亡細(xì)胞，使用流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。

  產(chǎn)品特點(diǎn)：

● 方便：可用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測；

● 快速：1小時內(nèi)即可完成實(shí)驗(yàn)；

● 準(zhǔn)確：能準(zhǔn)確區(qū)分活細(xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞，并計數(shù)各群細(xì)胞的比例。

  檢測方法：

流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡

  Annexin V-FITC / PI 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒樣本類型：

● 懸浮細(xì)胞

● 貼壁細(xì)胞

樣品染色：

1、 離心收集懸浮細(xì)胞。離心機(jī)300-500g，2-8°C，離心時間5min，棄培養(yǎng)基。

2、 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次。（300g，2-8°C，離心時間5min收集細(xì)胞）。

3、 用400ul 1X Annexin V結(jié)合液懸浮細(xì)胞，濃度大約為1 X 106 cells/ml。

4、 在細(xì)胞懸浮液中加入5ul Annexin V-FITC染色液，輕輕混勻后于2-8°C避光條件下孵育15分鐘。

5、 加入5-10ul PI染色液后輕輕混勻于2-8°C避光條件下孵育5分鐘。

6、 立即用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測。

流式細(xì)胞儀分析：

經(jīng)處理過的細(xì)胞此時可以在流式細(xì)胞儀上分析。激發(fā)波長為488nm。

按照常規(guī)的流式凋亡檢測的操作即可。

Annexin V-FITC的綠色熒光發(fā)射波長530nm，信號可以通過FL1（FITC接收器）通道檢測；PI紅色熒光在620nm，通過FL2（Propidium iodide接收器）通道或FL3通道檢測。

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