細胞耗氧率OCR檢測方法

耗氧量分析是研究代謝的有用工具。耗氧量測量結(jié)果是細胞代謝功能，更具體而言是線粒體功能的關(guān)鍵性指示。通過這類指標來探究活細胞代謝，可為細胞功能以及代謝變化在疾病進展中的作用提供深入洞察。

線粒體功能對細胞代謝、存活和能量產(chǎn)生至關(guān)重要。線粒體呼吸受損與病理狀態(tài)（如癌癥、缺血性再灌注損傷和神經(jīng)退行性疾病）有關(guān)。線粒體毒性也是安全相關(guān)的抗藥性和藥物戒斷癥狀的常見原因。

R01耗氧量分析可以實時測量全細胞或分離線粒體的耗氧量，是以高通量形式來評估用于代謝表征的細胞呼吸以及評估治療對線粒體功能毒性作用的一種可靠方法。它可以使用熒光酶標儀在標準微孔板上進行有氧代謝的簡單動力學(xué)測定。隨著呼吸作用的進行，溶解氧被消耗，樣品中的氧氣濃度降低，導(dǎo)致R01 分析的信號增加，從而實現(xiàn)對耗氧量的測定。

R01是氧氣敏感的熒光探針，最大激發(fā)波長為 468nm，最大發(fā)射波長為 603nm。其熒光通過分子碰撞與氧氣反應(yīng)，由O₂淬滅，在無氧條件下熒光強度更高，反之有氧條件下熒光強度變低，因此熒光信號的量與樣品中細胞外O₂的量成反比，從而BBoxiProbe^® R01可被用于監(jiān)測細胞外氧氣消耗的變化。在測定中，耗氧率由熒光信號隨時間的變化計算。細胞耗氧量增加，熒光信號的變化率增加；反之，耗氧量減少，熒光信號的變化率降低。

R01與O₂的這種反應(yīng)是非破壞性且可逆的， R01沒有細胞毒性，其是化學(xué)穩(wěn)定的，惰性的，水溶性的和細胞不滲透的，不能透過完整的細胞膜。因此還可以同時與糖酵解， 線粒體膜電位JC-1， ROS和細胞ATP 、LDH等檢測的試劑結(jié)合使用，進行多參數(shù)檢測。

用R01進行細胞外耗氧檢測方法及其簡單，不需要適用特殊的儀器設(shè)備，只需要熒光酶標儀之類的熒光讀板設(shè)備即可。可以用于直接，實時分析細胞呼吸和線粒體功能。適用于測量各種全細胞（貼壁和懸浮細胞），透化細胞，各種3D培養(yǎng)物，組織，小生物，球體，支架和基質(zhì)等。還適用于分離的線粒體，分離的酶，細菌，酵母和霉菌等的細胞外耗氧情況測量。