細胞外酸化率（ECAR）檢測方法

細胞外酸化（Extracellular Acidification ；ECA）測量可以為糖酵解（glycolytic）活性研究提供豐富的信息，細胞外酸化率（ECAR）的檢測可用于代謝表征并確定具體的干預(yù)措施（如養(yǎng)分缺失、缺氧、藥物治療或遺傳基因操控）如何影響糖酵解通量。

細胞代謝與癌癥、心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病、肥胖、糖尿病及干細胞等多個領(lǐng)域息息相關(guān)。糖酵解是真核細胞中的關(guān)鍵代謝途徑，在分化、增殖和 ATP 生成等生理過程中起重要作用。糖酵解的改變對多種疾病也具有重要意義，包括但不限于癌癥、心血管疾病和代謝疾病。

能量代謝指標胞外酸化率（ECAR）可幫助研究人員更多地了解細胞對外界的應(yīng)激反應(yīng)和運作機制。但以往細胞代謝的檢測技術(shù)存在較多限制，例如難以對細胞代謝進行連續(xù)、實時的檢測；一些專門檢測細胞代謝的儀器、硬件貴，試劑耗材消耗成本高，實驗重復(fù)性低且只能檢測有限指標。

與傳統(tǒng)的終點糖酵解分析不同， 該糖酵解分析可以實時測定細胞外酸化率  (ECAR)，可以觀察糖酵解機制的短暫變化和快速反應(yīng)。樣品不需要密封處理，在這些條件下， ECAR 是一種可靠且穩(wěn)定的糖酵解活性測定方法。

細胞外酸化率（ECAR）檢測試劑盒（Extracellular acidification Rate Assay Kit）（BB-48311）是利用合成的酸化檢測熒光探針 BBcellProbe® P61 來檢測細胞外酸化情況變化的試劑盒。可以通過簡單的混合基于熒光酶標儀便捷的直接進行細胞外酸化情況的動態(tài)實時測定?？梢詫崟r測量細胞糖酵解活性，是以高通量形式來評估用于代謝表征的細胞呼吸以及評估治療對細胞功能毒性作用的一種可靠方法。

它可以使用熒光酶標儀在標準微孔板上進行簡單動力學(xué)測定。隨著糖酵解作用的進行，丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸，這將導(dǎo)致細胞外環(huán)境 pH 降低。P61 探針可以靈敏地檢測到 pH 降低，并表現(xiàn)為 P61 探針熒光信號增加，從而實現(xiàn)對 ECAR 的測定。

P61 最大激發(fā)波長為 488nm，最大發(fā)射波長為 580nm。其熒光在堿性條件下強度較弱，反之酸性條件下變強，從而 P61 可被用于監(jiān)測細胞外酸化的變化。在測定中，細胞外酸化率由熒光信號隨時間的變化計算。細胞外酸化增加，熒光信號的變化率增加；反之，酸化減少，熒光信號的變化率降低。


細胞酸化檢測試劑盒可以用于直接，實時分析細胞外酸化情況。本試劑盒可以用來測量各種全細胞（貼壁和懸浮細胞），各種 3D 培養(yǎng)物，組織，小生物，球體，支架和基質(zhì)等。